Q-VD-OPh, a pancaspase inhibitor, reduces trauma-induced apoptosis and improvesthe recovery of hind-limb function in rats after spinal cord injury

Background. Various caspases have been implicatedin the development of secondary damage after spinalcord injury (SCI). Anticaspase therapy that targets onlyone caspase has been investigated in a variety of in vitroand in vivo studies. This study examined the neuroprotectiveeffects of Q-VD-OPh, a pan-caspase inhibitor, ina rat model of SCI.Methods. Thirty Wistar albino rats were divided into3 groups of 10 each: the sham-operated controls (group1), the trauma-created controls (group 2), and the QVD-OPh–treated rats (group 3). An SCI (a trauma of40 g-cm) was produced at the thoracic level (T8-T10) bythe weight-drop technique. The response to injury andthe neuroprotective effects of Q-VD-OPh were investigatedby histopathologic examination and terminaldeoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labeling(TUNEL) 24 hours and 5 days after trauma. The inclinedplane technique of Rivlin and Tator and a modifiedversion of Tarlov’s grading scale were used to assess thefunctional status of the rats 24 hours, 3 days, and 5 daysafter injury.Results. Twenty-four hours after trauma, lightmicroscopic examination of a specimen taken fromgroup 2 rats revealed hemorrhage, necrosis, vascularthrombi, and edema. Group 3 tissue samples showedsimilar features at that time. Twenty-four hours aftertrauma, the mean apoptotic cell number was 4.47 ± 0.35cells in group 2 and 1.58 ± 0.33 in group 3. Five daysafter injury, the mean apoptotic cell count was 4.35 ±0.47 in group 2 and 1.25 ± 0.34 in group 3. Thus thenumber of TUNEL-positive cells in an injured spinalcord was greatly reduced by treatment with Q-VDOPh.The neurologic function scores (both the inclinedplane performance and motor grading scores) were significantlybetter in the Q-VD-OPh–treated (AU)

Introducción. En el desarrollo de daño secundario tras lesión medular están implicadas diversas caspasas.La terapia anti-caspasas ha utilizado como diana una sola caspasa que ha sido investigada en una gran variedad de estudios tanto in-vitro como in-vivo. Estos estudios han examinado el efecto neuroprotector delQ-VD-PPh, un inhibidor pan-caspasa, en un modelo delesión medular en rata. Material y métodos. Se dividieron 30 ratas Wistar entres grupos de 10 ratas cada uno: una lesión medulartraumática (con un trauma de 40 g-cm) se realizó anivel torácico grupo control (grupo 1), grupo traumacontrol (grupo 2) y el grupo de ratas tratadas con QVD-OPh (grupo 3) se realizó a nivel torácico (T8-T10) mediante la técnica de caída de peso. La respuesta a la lesión y los efectos neuroprotectores de Q-VD-OPh se valoraron mediante el examen histopatológico y la técnica de TUNEL 24 horas y 5 días tras el traumatismo. Se usó la prueba del plano inclinado de Rivlin y Tatory una versión modificada de la escala de Tarlov paravalorar el resultado funcional de las ratas 24 horas, 3 días y 5 días tras la lesión. Resultado. Veinticuatro horas tras la lesión, el estudio histopatológico de las secciones obtenidas del grupo 2 revelaron hemorragia, necrosis, trombos vasculares y edema. Las secciones obtenidos del grupo 3 mostraron hallazgos similares en ese momento. 24 horas tras lalesión el número de células apoptóticas fue 4.47 ± 0.35en el grupo 2 y 1.58 ± 0.33 en el grupo 3. Cinco días trasla lesión el número medio de células apoptóticas fue de4.35 ± 0.47 en el grupo 2 y de 1.25 ± 0.34 en el grupo 3. De esta forma el número de células TUNEL positivas enla médula dañada se redujo de forma considerable conel tratamiento con Q-VD-OPh (AU)

Calpain inhibitor AK 295 inhibits calpain-induced apoptosis and improves neurologicfunction after traumatic spinal cord injury in rats

Background: An increase in the level of intracellular calcium activates the calcium-dependent neutral protease calpain, which in turn leads to cellular dysfunction and cell death after an insult to the central nervous system. In this study, we evaluated the effect of a calpain inhibitor, AK 295, on spinal cord structure, neurologic function, and apoptosis after spinal cord injury (SCI) in a murine model. Methods: Thirty albino Wistar rats were divided into 3 groups of 10 each: the sham-operated control group (group 1), the spinal cord trauma group (group 2), and the spinal cord trauma plus AK 295 treatment group (group 3). After having received a combination of ketamine 60 mg/kg and xylazine 9 mg/kg to induce anesthesia, the rats in groups 2 and 3 were subjected to thoracic trauma by the weight drop technique (40 g-cm). One hour after having been subjected to that trauma, the rats in groups 2 and 3 were treated with an intraperitoneal injection of either dimethyl sulfoxide 2 mg/kg or AK 295 2 mg/kg. The effects of the injury and the efficacy of AK 295 were determined by an assessment of the TUNEL technique and the results of examination with a light microscope. The neurologic performance of 5 rats from group 2 and 5 from group 3 was assessed by means of the inclined plane technique and the modified Tarlov's motor grading scale 1, 3, and 5 days after spinal cord trauma. Findings: Light-microscopic examination of spinal cord specimens from group 2 revealed hemorrhage, edema, necrosis, and vascular thrombi 24 hours after trauma. Similar (but less prominent) features were seen in specimens obtained from group 3 rats. Twenty-four hours after injury, the mean apoptotic cell numbers in groups 1 and 2 were zero and 4.57 ± 0.37 cells, respectively. In group 3, the mean apoptotic cell number was 2.30 ± 0.34 cells, a value significantly lower than that in group 2 (P<.05). Five days after trauma, the injured rats in group 2 demonstrated significant motor dysfunction (P < .05). In comparison, the motor scores exhibited by group 3 rats were markedly better (P < .05). Conclusions: AK 295 inhibited apoptosis via calpaindependent pathways and provided neuroprotection and improved neurologic function in a rat model of SCI. To our knowledge, this is the first study to evaluate the use of AK 295, a calpain inhibitor, after SCI. Our data suggest that AK 295 might be a novel therapeutic compound for the neuroprotection of tissue and the recovery of function in patients with a SCI (AU)

Introducción: Una lesión en el sistema nervioso central origina un incremento en los niveles de calcio intracelular que activa la proteasa neutral calciodependiente calpaina, que a su vez conduce a la producción de disfunción y muerte celular. En este estudio evaluamos el efecto de un inhibidor de la calpaina, AK 295, sobre la estructura de la médula espinal, la función neurológica y apoptosis tras lesión medular en un modelo murino. Métodos: Treinta ratas Wistar se dividieron en tres grupos de 10 ratas cada uno: Un grupo control (grupo 1), un grupo sometido a trauma espinal (grupo 2) y un grupo de ratas a las que se sometió a trauma medular y tratamiento con AK 295 (grupo 3). Después de recibir una combinación de ketamina 60 mg/kg y xylazina 8 mg/kg para la inducción anestésica, las ratas del grupo 2 y 3 fueron sometidas a trauma medular torácico mediante la técnica de caída de peso (40 g-cm). Una hora después de haber sufrido el traumatismo, las ratas del grupo 2 y 3 fueron tratadas mediante una inyección intraperitoneal bien de dimetil-sulfóxido 2 mg/kg o de AK 295 2 mg/kg. Los efectos del traumatismo y la eficacia de AK 295 fueron determinados mediante la estimación de la técnica TUNEL y los resultados del examen del tejido mediante microscopía óptica. La función neurológica de 5 ratas del grupo 2 y 5 del grupo 3 fue estimada mediante la técnica del plano inclinado y la escala motora de Tarlov modificada a 1, 3 y 5 días desde el traumatismo medular. Resultados: El estudio mediante microscopía óptica de las preparaciones de médula espinal del grupo 2 demostró la existencia de hemorragia, edema, necrosis y trombosis vascular 24 horas tras el traumatismo. Hallazgos similares pero menos importantes se encontraron en las preparaciones procedentes del grupo 3. Veinticuatro horas tras el trauma, el número medio de células apoptóticas en los grupos 1 y 2 fueron cero y 4.57 ± 0.37 células respectivamente. En el grupo 3, el número medio de células apoptóticas fue de 2.30 ± 0.34 células, un valor significativamente menor que en el grupo 2 (p < 0.05). Cinco días tras el traumatismo, las ratas lesionadas en el grupo 2 demostraron una significativamente mayor disfunción neurológica (p < 0.05). En comparación, la puntuación motora que exhibieron las ratas del grupo 3 fue marcadamente mejor (p < 0.05). Conclusión: AK 295 inhibe la apoptosis a través de vías calpain-dependientes y provee neuroprotección y consigue una mejor función neurológica en el modelo de lesión medular traumática en la rata. En nuestro conocimiento, este es el primer estudio en evaluar el uso de AK 295, un inhibidor de la calpaina, tras lesión medular traumática. Nuestros datos sugieren que AK 295 podría ser un nuevo compuesto terapéutico capaz de ofrecer neuroprotección tisular y recuperación funcional en pacientes con lesión medular traumática (AU)